海南坡鹿HSF1cDNA的克隆与表达

• 作者: 刘涛 吴科榜 成鹰 李治深 杜丽 林杰材 林贤梅 满初日嘎 王凤阳 符运南 许世英
• 来源期刊: 兽类学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 海南坡鹿 HSF1 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 191-197
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 5083字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1050.2009.02.014

摘要

采用RT-PCR和RACE方法扩增海南坡鹿热休克转录调节因子1(Heat shock transcription factor 1,HSF1)cDNA全长,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析;构建pET28a-hdHSF1表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果显示,海南坡鹿HSF1cDNA全长为2 036 bp,含有1个1 578 bp的开放阅读框,编码525个氨基酸.经生物信息学分析,HSF1是一个等电点为4.93的亲水性蛋白.经IPTG诱导表达后,得到一个带组氨酸标签的约62 kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约62 kD特异性抗体结合带,表明海南坡鹿HSF1原核表达载体成功构建并表达.