肺炎链球菌comD/E/C基因重组表达及ComD/C与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性

• 作者: 严杰 夏肖萍 孙爱华 孙琦 樊欢
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 链球菌,肺炎/遗传学 聚合酶链反应 信号传导 β内酰胺酶类 抗药性,细菌 基因表达 重组蛋白质类 基因表达调控,细菌
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 276-282
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.03.010

摘要

目的:构建肺炎链球菌调控感受态形成的二元信号传导系统(TCS)基因comD/comE/comC的原核表达系统,探讨ComD和ComC封闭后细菌耐药性变化.方法:采用PCR扩增全长comD、comE和comC基因,并用常规基因工程技术建立其原核表达系统.采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组蛋白rComD、rComE和rComC表达量.免疫家兔制备rComD、rComE和rComC抗血清.检测肺炎链球菌菌株ComD和ComC被抗血清封闭后对青霉素和头孢胺噻耐药性的变化.结果:与报道序列比较,所克隆的comD、comE和comC基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.4%～99.3%和99.1%～100%.所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coli BL21DE3pET42a-comE和E.coli BL21DE3pET32a-comC能有效表达目的重组蛋白rComD、rComE和rComC,其产量分别为细菌总蛋白的28%、25%和35%.rComD、rComE和rComC抗血清免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶8.ComD和/或ComC被抗血清封闭后,头孢胺噻敏感菌株可出现耐药性,但耐药菌株耐药性无明显改变,也不影响各菌株对青霉素的耐药性.结论:本研究成功地构建了肺炎链球菌comD/come/comC基因原核表达系统,为深入研究感受态形成相关TCS与耐药性关系奠定了基础.ComD和ComC与肺炎链球菌对头孢胺噻耐药性有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙爱华		112	523	11.0	15.0
2	孙琦		20	69	5.0	8.0
3	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
4	夏肖萍	浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科	9	57	4.0	7.0
5	樊欢	浙江大学医学院病原生物学系	3	15	2.0	3.0