禽流感病毒感染与疫苗免疫鉴别诊断试纸条的研制及应用

• 作者: 刘梅 张文泽 彭伏虎 李自力 毕丁仁 肖运才 胡思顺 蔡开妹 郑兴华
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感 NS1蛋白 胶体金试纸条
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 694-700
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.02.039

摘要

[目的]结合胶体金免疫层析技术建立一种适合养鸡业基层生产人员使用的便捷的快速诊断禽流感病毒感染鸡群的方法.[方法]将含禽流感病毒非结构基因ns1的表达载体KG-NS1转化入BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆进行诱导表达,表达产物用GST亲和层析柱进行纯化和Western-blot分析;以NS1重组蛋白为诊断抗原,抗鸡IgFc的单抗标记的胶体金为示踪物,结合免疫层析技术,组装禽流感病毒NS1抗体的免疫胶体金鉴别诊断试纸条,评价其灵敏度和特异性,并对试验感染和临床采集的血样进行检测. [结果]NS1重组蛋白分子量约为52 kD,具有免疫学活性.在25 min内用肉眼观察到禽流感病毒感染鸡血清和NS1蛋白免疫鸡血清在试纸条的检测线处出现明显的棕红色,呈明显的阳性反应,而其它病原的血清在试纸条的检测线处不出现任何颜色,呈阴性反应.而且感染鸡群的NS1抗体在感染后3 d即可检测到,感染后1～2周为高峰期,维持时间约1周,检测阳性率为80%左右.临床样品的阳性率为9.1%.[结论]试纸条使用方便,操作简单,25 min内可以用肉眼判断结果,可区分禽流感疫苗免疫和野毒感染家禽,具有很大的推广应用价值.