抗冻蛋白AFPⅢ的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 付伟超 康庄丽 张桂玲 胡文革 郝凤霞
• 来源期刊: 水产科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗冻蛋白 原核表达 重组融合蛋白 纯化 抗体
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 671-674
• 页数: 4页
• 分类号: Q51
• 字数: 3783字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-1111.2009.11.014

摘要

采用基因重组技术将AFPⅢ基因与原核表达载体pET32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过PCR、单双酶切及测序鉴定构建结果.用IPTG诱导蛋白表达,将融合蛋白纯化后,免疫6-7周龄的小白鼠,制备AFPⅢ多克隆抗体,采用Western印迹法检验抗体特异性.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定多克隆抗体滴度.成功地构建了AFPⅢ的原核表达载体,经在大肠杆菌中诱导表达、镍柱亲和层析纯化,得到较纯的相对分子质量约26 000 Da的融合蛋白,免疫小白鼠后得到多抗血清,Western印迹结果显示此多克隆抗体与AFPⅢ蛋白特异性结合.该试验为进一步研究AFPⅢ在转基因鱼中的定点表达以及作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡文革	新疆石河子大学生命科学学院	6	22	2.0	4.0
2	郝凤霞	新疆石河子大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
3	付伟超	新疆石河子大学食品科学学院	1	2	1.0	1.0
4	康庄丽	新疆石河子大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
5	张桂玲	新疆石河子大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0