抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其产物体外抗病毒活性的研究

• 作者: 严杰 孙爱华 孙琦
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗菌肽 Alloferon-1 串联式重组表达 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1202-1205
• 页数: 4页
• 分类号: R978.1+6
• 语种: 中文

摘要

目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗病毒活性.方法:采用基因工程技术构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因及其原核表达系统.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量.采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法,提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK.采用CPE观察和MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抗IV-A3、CV-B4和RSV-E6株的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAllofer-on-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗病毒活性比较.结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coli BLDE3.该原核重组表达系统串联式表达的目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK产量约为细菌总蛋白的30%.Ni-NTA和Sephadex G-50层析后可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK.25 μg/ml的各Alloferon-1s均无明显的抗病毒作用,50 μg/ml和100 μg/ml的各Alloferon-1s有抗IV-A3和RSV-E6株作用且活性相似(P>0.05),但各Alloferon-1s均无抗CV-B4株的作用.结论:本研究成功地构建了串联表达Alloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗病毒活性.