基于克隆表达的芳香烃受体系统的二噁(口英)生物检测方法研究

• 作者: 吴蕴棠 宓怀风 张万起 汤乃军 沈钧 王卓 王影 赵娜
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 受体,芳香烃 芳香烃受体核转位子 克隆,分子 抗体 四氯二苯并二噁(口英)
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 705-709
• 页数: 5页
• 分类号: R9
• 字数: 4522字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2009.08.014

摘要

目的 研究人工克隆表达的芳香烃受体核转位蛋白(ARNT)与天然芳香烃受体(AhR)特异性结合及其对制备的多克隆抗体识别的情况,通过两者结合与二噁(口英)(TCDD)的剂量反应关系,探索TCDD生物检测方法.方法 (1)以小鼠肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增目的 基因AhR-PAS[periodicity(Per)/Aryl hydrocarbon nuclear translocatar(ARNT)/single-minded(Sim)]端、AhR羧基末端(AhR-C端)、ARNT-PAS端,构建含有目的 基因的pGEX-5X1重组表达质粒,并采用大肠杆菌原核系统进行克隆表达.(2)用上述克隆表达的AhR片段蛋白(AhR-PAS、AhR-C)作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体.(3)从C57BL/6J纯系小鼠肝组织中提取具有结合活性的天然AhR复合物,将天然AhR复合物与结合在谷胱甘肽硫转移酶(GST)上面的融合蛋白GST-ARNT-PAS,分别在0.25、0.50、1.00、2.00 pmol TCDD存在的条件下进行结合,通过亲和吸附和免疫印迹观察所形成的蛋白复合物的量.结果 (1)成功构建含有目的 基因AhR-PAS、AhR-C和ARNT-PAS的重组质粒,并通过大肠杆菌原核系统表达出具有结合活性的目的 蛋白;(2)免疫家兔制得的多克隆抗体AhR-PAS、AhR-C的检测下限分别为5、1 ng;(3)测得该法制备的小鼠肝脏匀浆中总蛋白质的浓度为60.5 mg/ml;在TCDD存在的条件下,克隆得到的融合蛋白GST-ARNT-PAS能够与天然AhR复合物特异性地结合,并测得检测下限为0.25 pmol,约80 Pg TCDD.结论 成功地建立了基于克隆表达的芳香烃受体系统的TCDD生物检测方法,且检测下限达到pg级别.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵娜	天津医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室	47	188	7.0	11.0
2	汤乃军	天津医科大学公共卫生学院劳动卫生教研室	63	313	10.0	13.0
3	沈钧	天津医科大学公共卫生学院卫生化学教研室	30	205	8.0	13.0
4	张万起	天津医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室	69	383	11.0	15.0
5	吴蕴棠	天津医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室	60	378	11.0	16.0
6	王卓	天津市疾病预防控制中心非传染病预防控制所	35	198	9.0	11.0
7	宓怀风	南开大学化学院高分子研究所	8	77	4.0	8.0
8	王影	天津市疾病预防控制中心非传染病预防控制所	1	0	0.0	0.0