甲胎蛋白对人肝癌Bel 7402细胞caspase信号传递及耐受TRAIL的影响

• 作者: 刘新华 周升 李刚 李孟森 詹志农
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 甲胎蛋白 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 肿瘤耐药 肝癌细胞 caspase信息通路
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 159-168
• 页数: 10页
• 分类号: R318
• 语种: 中文

摘要

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对人肝癌Bel 7402细胞内caspase信息通路信号传递的影响,以及对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌细胞凋亡的对抗作用.方法 激光共聚焦显微镜观察AFP与caspase-3、caspase-8 在Bel 7402细胞内的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与caspase-3、caspase-8的相互作用;RNA干扰(RNAi)技术封阻AFP表达,并用Western blotting检测RNAi干扰肝癌Bel 7402细胞内AFP表达的效果;用蛋白酶活性比色法检测AFP对肝癌细胞 caspase-3、caspase-8活性的影响;MTT法分析干扰AFP表达30 h后再给予TRAIL(2nmol/L)处理24 h,Bel 7402细胞的生长情况,并用荧光显微镜观察经TRAIL处理后肝癌细胞的凋亡状况.结果 共聚焦显微镜观察发现AFP、caspase-3、caspase-8主要表达于Bel 7402细胞的细胞质,发现AFP能与 caspase-3共定位于细胞质,但与caspase-8在细胞质的共定位可能性很小;Co IP技术研究发现AFP能与caspase-3结合,但不能与caspase-8结合;2nmol/L 剂量的TRAIL单独处理Bel 7402细胞并不能显著改变caspase-3活性,但能提升caspase-8活性,而用全反式维甲酸(ATRA)40 μmol/L加TRAIL(2nmol/L)处理时,则能提高Bel 7402细胞caspase-3活性;干扰AFP表达后,单独用TRAIL(2nmol/L)也能激活caspase-3,而干扰AFP表达前后对caspasE-8活性没有显著性改变;MTT分析发现, 2nmol/L剂量的TRAIL对Bel 7402细胞的生长并没有显著性抑制作用,但是干扰AFP表达后TRAIL(2nmol/L)能明显抑制Bel 7402细胞生长(抑制率为48.4%);荧光显微镜观察表明,干扰AFP表达后TRAIL(2nmol/L)能诱导Bel 7402细胞凋亡.结论 AFP选择性抑制caspasE-3活性是阻断人肝癌Bel 7402细胞内凋亡信息传递的重要机制,也是AFP抵抗TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的关键环节.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	詹志农	海南医学院检验医学系	10	54	4.0	7.0
2	李孟森	海南医学院分子生物学重点实验室	30	55	5.0	6.0
4	李刚	北京大学医学部生物化学与分子生物学系	79	300	9.0	14.0
5	周升	海南医学院分子生物学重点实验室	20	86	5.0	8.0
8	刘新华	北京大学医学部生物化学与分子生物学系	7	20	3.0	4.0