高效除磷工程菌Pseudomonas putida GM6-PPK1的构建及其除磷能力研究

• 作者: 刘卫东 刘娟 崔中利 曹慧 李波 赵晓丽 高雅英
• 来源期刊: 土壤
• 学科: 农学
• 关键词: 强化生物除磷 多聚磷酸盐 多聚磷酸盐激酶 基因工程菌
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 600-606
• 页数: 7页
• 分类号: S154.39
• 字数: 4222字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9829.2009.04.016

摘要

ppk1 基因编码的多聚磷酸盐激酶主要负责多聚磷酸盐的合成,其表达量的高低直接决定聚磷菌的聚 P 能力的强弱.Pseudomonas putida GM6 是从 EBPR 好氧池活性污泥中分离获得的一株具有聚 P 能力的菌株,该菌株含有两个编码多聚磷酸盐激酶的基因(ppk1 和 ppk2).通过 PCR 从高效聚磷菌株总 DNA 中扩增得到了 ppk1 及其启动子,并定向克隆到 pBBRMCS-5 载体上,构建了重组质粒 pMEPE-PPK,在辅助质粒 pRK2013 的帮助下,通过三亲接合将 pMEPE-PPK 转移到原始菌株 GM6 中,获得的工程菌 P. putida GM6-PPK1.GM6-PPK1 除 P 能力较原始菌株 GM6 和对照菌株 GM6-P5 提高了 54%,生长能力较原始菌株也有一定增强.通过模拟 EBPR 工艺,发现 GM6-PPK1 在厌氧/好氧交替的环境条件下强化表达不但提高了菌体好氧段的吸 P 能力,而且厌氧段 P 的释放和 PHA 的合成较之原始菌株也有显著增加.