早熟禾ISSR反应体系的优化

• 来源期刊: 中国草地学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 早熟禾 ISSR 正交优化
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 107-111
• 页数: 5页
• 分类号: Q943.2
• 字数: 3277字
• 语种: 中文

摘要

以早熟禾基因组DNA为模板.利用正交设计,对影响ISSR反应体系的主要因素(Mg2+、dNTP、Taq酶)从4个水平上进行筛选和优化,建立了适合早熟禾的最佳ISSR反应体系:25μl反应体系中1.25U Taq酶、1.5mmol/L Mg2+,10×PCR Buffer 2.5μl、0.4 mmol/L dNTP、1μl引物、1μl DNA模板.扩增程序为:94℃预变性3min;94℃变性30s,56.4℃退火30s,72℃延伸1min,循环35次;72℃延伸7min,4℃保存.在此反应体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的条带.