SUMO-BMP7融合蛋白的表达及纯化

• 作者: 于杰淼 卢悟广 张娟 曹鹏 王旻 蔡雪婷
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 小泛素样修饰蛋白 骨形态发生蛋白7 克隆 融合表达 纯化
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 189-193
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

采用融合表达技术,将BMP-7与SUMO(Small ubiquitin-related modifier)基因通过PCR技术连接起来,组成SUMO-BMP7基因片段,双酶切后插入到pET28a载体中克隆,挑取单克隆进行酶切及菌落PCR检测,提取检测结果为阳性的质粒,转化进大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.SUMO属于小泛素样修饰因子,具有帮助蛋白质折叠的作用,可提高目的蛋白的表达量和增加目的蛋白的可溶性,经特异性酶切后,目的蛋白能够得到天然的N末端;结果:表达后经超声、Ni-NTA纯化得到SUMO-BMP7融合蛋白.确定了可溶性SUMO-BMP7适宜的诱导温度、诱导时间和IPTG浓度,得到了电泳纯度大约98%的SUMO-BMP7融合蛋白;获得的可溶性融合蛋白,具有很高的表达量.分离纯化后,SDS-PAGE纯度可达到98%左右.为其下一步的酶切和活性研究提供基础.