rAAV2-NTF2对糖尿病大鼠血视网膜屏障的保护作用

• 作者: 史煜 唐仕波 曹亮 李斌 李永浩 李涛 谢琳 马红婕
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 糖尿病视网膜病变 核运输因子2 腺相关病毒 血-视网膜屏障
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 759-763
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 4350字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2009.04.027

摘要

目的: 观察2型重组腺相关病毒－核运输因子2(rAAV2-NTF2)对糖尿病大鼠血视网膜屏障功能损伤的拮抗作用.方法: 伊凡思蓝(EB)灌注铺片观察糖尿病大鼠视网膜血管分布和形态.亚克隆构建pSNAV－NTF2载体, 腺相关病毒包装形成rAAV2-NTF2.成年雄性Wistar大鼠,以右眼为实验眼,玻璃体腔注射4 μL rAAV2-NTF2,左眼为对照眼,玻璃体腔注射rAAV2-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)4 μL.1个月后取4只大鼠左眼,固定后取视网膜制备全视网膜铺片,荧光显微镜下观察EGFP表达情况.再行STZ腹腔注射诱导糖尿病,同时设单纯糖尿病组(diabetes,D组)和正常组(normal,N组).糖尿病1个月后以45 mg/kg剂量静脉注射EB,循环2 h后1%多聚甲醛枸橼酸缓冲液灌注并摘除眼球取视网膜,置于甲酰胺中浸泡提取染料,用分光光度计测量甲酰胺中染料的浓度.结果: 正常组大鼠可见在低背景荧光下视网膜血管对EB有很好的屏障作用,糖尿病2周大鼠视网膜血管仅见背景荧光增强,糖尿病1月后血管出现异常节段性扩张,局部血管周围EB渗漏.糖尿病1个月大鼠视网膜内EB浓度是正常组的4.67倍,P<0.01,提示糖尿病大鼠血-视网膜屏障受损.玻璃体腔注射rAAV2-NTF2,视网膜内EB浓度为(8.30±4.16)μg/g视网膜干重,较对侧眼(22.13±8.43)μg/g视网膜干重明显减少,可以部分改善血-视网膜屏障的破坏,降低EB-白蛋白渗漏(P<0.05).结论: 玻璃体腔注射rAAV2-NTF2可减轻糖尿病大鼠视网膜血-视网膜屏障功能的破坏,为糖尿病视网膜病变的基因治疗提供了实验依据.