大鼠瘦素受体RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 刘正娟 汪晓霞 王玉川 赵永利 闫冬
• 来源期刊: 大连医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 瘦素受体 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: R725
• 字数: 2381字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建大鼠OBRb基因的RNAi慢病毒载体,并评估其对OBRb基因表达的沉寂作用.[方法]设计大鼠OBRb的siRNA靶序列,合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,退火后插入到慢病毒载体质粒pRNA-lentivector-VGFP上,构建pRNA-Lenti-OBRb-VGFP表达重组体;为了评估RNAi基因沉寂作用,将构建的慢病毒载体转染表达OBRb的C6大鼠神经胶质瘤细胞,利用Realtime PCR方法检测OBRb mRNA表达水平.[结果]将目的序列连接到慢病毒载体上,成功构建pRNA-Lenti-OBRb-VGFP表达重组体;通过PCR、电泳初步鉴定该重组体有OBRb表达,并进一步进行基因测序证实插入序列正确;成功将慢病毒载体转染到C6大鼠神经胶质瘤细胞,转染效率可达40%;荧光实时定量PCR检测OBRb基因表达量,结果干扰组的OBRb mRNA表达水平明显低于非干扰序列的对照组,可使OBRb mRNA表达量下调近80%.[结论]成功构建大鼠OBRb 的RNAi慢病毒载体,为进一步的体内研究奠定了基础.