滚环扩增在乙型肝炎病毒cccDNA检测中的应用

• 作者: 任晓强 刘妍 刘立明 徐东平 李保森 苏何玲 邹正升 钟彦伟 高峰
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 滚环扩增 共价闭合环状DNA
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 乙型肝炎病毒学致病机制研究
• 页码范围: 675-678
• 页数: 4页
• 分类号: R512.63
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.06.008

摘要

目的 建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法 .方法 以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象.根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBV cccDNA的正、负链结合.在Phi29 DNA聚合酶的作用下,获得线性多拷贝cccDNA扩增产物,以该产物为模板获得cccDNA全序列;通过对模板的系列稀释鉴定RCA方法 的灵敏度;以RCA产物为模板扩增肝组织cccDNA的反转录酶区基因,并与同时扩增的同时间采集的同一患者血清中的rcDNA序列进行比较.结果 成功建立了HBV cccDNA全序列的RCA方法 ,最低可检测到10个拷贝的cccDNA分子,并获得了所有扩增cccDNA的全基因序列.27例患者中,18例患者的肝组织CCCDNA和血清rcDNA反转录酶区的序列完全一致,9例患者中共检出 84个不同的核苷酸位点,平均每个患者9.3个,84个不同核苷酸中只有5个引起了氨基酸的改变.结论 滚环扩增方法 对肝组织HBV cccDNA的检测具有较好的灵敏度.该方法 的建立对深入了解cccDNA在HBV致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘妍	解放军第302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	62	535	12.0	21.0
2	徐东平	解放军第302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	43	350	10.0	17.0
3	李保森	解放军第302医院感染4科	33	284	9.0	16.0
4	高峰	解放军第302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	19	130	6.0	10.0
5	刘立明	解放军第302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	22	127	6.0	11.0
6	邹正升	解放军第302医院感染4科	36	323	11.0	17.0
7	任晓强	内蒙古农业大学生物工程学院	1	19	1.0	1.0
8	苏何玲	解放军第302医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室	1	19	1.0	1.0