适用于棉花荧光原位杂交的DNA纤维高效制备技术

• 作者: 刘方 宋国立 张香娣 彭仁海 王坤波 王春英 王玉红 黎绍惠
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 棉花 荧光原位杂交 DNA纤维 高效制备
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 412-417
• 页数: 6页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2009.00412

摘要

棉花富含酚类和多糖等高分子次生化合物,细胞质浓厚,且染色体形态小、数目多、制片困难,至今还未见棉花DNA纤维制备方面的报道.本研究用"刀切引流法",在含有Triton X-100和PVP40的冰冷细胞核提取缓冲液中,用锋利的刀片切割发育一周的棉花黄化子叶以释放棉花细胞核,所得细胞核干净完整杂质少,不需要研磨和巯基乙醇等处理,方便快捷无毒害,成功率达到100%.细胞核在室温下经温和碱裂解去除染色质上的蛋白质后,以前端导引裂解液铺展载玻片,即"引流法"拉伸制备DNA纤维,避免了液体表面张力的影响,消除了因载玻片推抹用力不均而导致的DNA纤维堆积和断裂,所制备的DNA纤维平直完整、伸展程度均匀、背景清晰.用基因组和45SrDNA分别标记探针进行杂交,结果表明所制备的棉花DNA纤维适用于荧光原位杂交.本研究探索出一套简单、高效、快捷、无毒害的适宜于棉花荧光原位杂交的DNA纤维制备技术,必将为棉花基因组研究和全基因组序列的最终完成提供强有力的技术支持.