转植酸酶基因家蚕的制作及表达检测

• 作者: 周泽扬 夏庆友 李春峰 李智 甘进锋 蒙炳超 黄科
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 农学
• 关键词: 家蚕 转基因蚕 piggyBac 转基因 绿色荧光蛋白 植酸酶
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 713-720
• 页数: 8页
• 分类号: S881.2|Q78
• 字数: 6103字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0454-6296.2009.07.001

摘要

家蚕Bombyx mori丝腺具有高效合成蛋白质的特性,开发在丝腺特异表达外源蛋白质的生物反应器具有重要的意义.本研究利用piggyBac来源的两种载体pPIGA3GFP和pBac{3×P3-EGFPaf},建立了稳定的家蚕转基因技术体系;然后,利用一株黑曲霉来源的植酸酶基因,构建了在家蚕后部丝腺特异表达的融合表达载体pBac [ 3×P3-EGFP+ FibLphyADsRed],注射蚕卵后,在53个G1蛾区中检测到3个有荧光蚕的蛾区.经Southern blot和反向PCR验证,转基因表达盒整合到家蚕染色体上.RT-PCR结果显示,植酸酶基因特异性地在后部丝腺表达,其表达模式与家蚕轻链丝素基因一致.结果表明我们成功获得了在后部丝腺特异表达植酸酶融合蛋白的转基因蚕,这为进一步开发家蚕生物反应器,利用转基因蚕生产各种重组蛋白具有积极的促进作用.