透析法体外复性抗凝溶栓双功能HV12p-rPA融合蛋白

• 作者: 余蓉 吴梧桐 李磊 梁兰 邓璇
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: HV12p-rPA 包涵体 透析 氧化 复性
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 140-143
• 页数: 4页
• 分类号: Q503
• 语种: 中文

摘要

探索表达于大肠杆菌中的抗凝溶栓双功能水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白(The fusion protein of 12 peptideof hirudin and reteplase,HV12p-rPA)的体外复性方法.采用直接透析复性和氧化复性结合透析复性两种方式,并分析复性时间、温度、适宜的氧化-还原体系比例对复性率的影响.分别测定其体外抗凝活性和纤溶活性,确定复性效果.结果显示:将变性溶解的HV12p-rPA在含8 mol/L 脲,0.05 mmol/L GSSG,0.7 mol/L L-Arg的50 mmol/L GIy-NaOH(pH 9.20)缓冲液中于25℃氧化复性6 h后,再在含0.5 mol/LL-Arg,1 mmol/L胱氨酸,2 mmol/L半胱氨酸的20 mmol/L Gly-NaOH(pH 9.20)缓冲液中于4℃进行梯度脲浓度透析,每隔8 h换液一次,透析48 h,可获得具有抗凝活性为730 ATU/mg,纤溶活性为19768 IU/mg的可溶性蛋白质.