TrKA特异小干扰RNA表达载体构建及对乳腺癌细胞增殖的影响

• 作者: 刘臣彪 杨清玲 滕凤猛 王惠 章菊 陈昌杰
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 医学
• 关键词: 小干扰RNA TrKA 乳腺癌MCF-7细胞
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 36-41
• 页数: 6页
• 分类号: R737.9
• 字数: 5176字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616X.2009.01.009

摘要

背景与目的:构建TrKA特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对神经生长因子(NGF)促细胞增殖作用和对细胞周期的影响.材料与方法:通过Genbank提供的TrKA基因mRNA全序列,应用设计软件选择设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与PsilencerTM 4.1-CMV reo质粒载体连接,经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染乳腺癌MCF-7细胞.利用G418筛选稳定表达TrKA-siRNA的MCF-7细胞株,通过Real-time PCR、Western blot和免疫组化在mRNA和蛋白水平检测TrKA的表达水平.MTT法检测TrKA干扰后NGF对细胞增殖作用的影响.流式细胞术观察细胞周期的变化.结果:序列测定表明成功构建TrKA-siRNA表达载体,Real-time PER显示TrKA mRNA下调74.7%(P＜0.05),Western blot显示蛋白表达下降80.5%,免疫组化结果也显示TrKA蛋白表达下降.试剂盒提供阳性对照GAPDH基因其表达水平下降85.0%(P＜0.05).MTT检测显示,NGF组细胞增殖反应均较NGF+siRNA组、siRNA组和对照组明显升高(P＜0.05),NGF+siRNA组的细胞增殖反应较其余各组下降(P＜0.05),表明TrKA干扰能有效抑制NGF诱导的乳腺癌细胞MCF-7的增殖.流式细胞术检测细胞周期结果显示:与对照组相比,NGF+siRNA组和siRNA组细胞G0/G1期增加,S期减少(P＜0.05),细胞周期阻滞于Go/G,期.结论:TrKA特异siRNA表达载体有效下调TrKA基因的表达,并抑制NGF引起的细胞增殖效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈昌杰	蚌埠医学院生化与分子生物学教研室	123	549	10.0	17.0
2	杨清玲	蚌埠医学院生化与分子生物学教研室	76	343	9.0	14.0
3	王惠	蚌埠医学院临床检验诊断实验中心	17	56	5.0	6.0
4	滕凤猛	蚌埠医学院临床检验诊断实验中心	5	14	3.0	3.0
5	章菊	蚌埠医学院临床检验诊断实验中心	12	42	4.0	5.0
6	刘臣彪	蚌埠医学院临床检验诊断实验中心	7	13	2.0	3.0