真核表达载体pEGFP-N1-VP3的构建及在SGC-7901细胞中的表达和定位

• 作者: 刘少宁 向廷秀 吕琳 曹红丹 王丕龙 王丽娟 祖毅
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 凋亡素 融合蛋白 真核表达 胃癌细胞
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 15-18,30
• 页数: 5页
• 分类号: R730.23
• 字数: 3792字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-9632.2009.01.015

摘要

构建真核表达载体pEGFP-N1-VP3并稳定转染人胃癌细胞SGC-7901,观察EGFP-VP3融合蛋白在肿瘤细胞中的分布和亚细胞定位,探讨凋亡素诱导肿瘤细胞凋亡的机制.用PCR技术扩增出(凋亡素)VP3基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,鉴定无误后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-VP3经脂质体介导转染SGC-7901细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察凋亡素在肿瘤细胞中的分布、亚细胞定位.用AO/EB荧光染色法检测其在体外诱导肿瘤细胞凋亡的效应.经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入载体pEGFP-N1,稳定转染细胞中EGFP-VP3在肿瘤细胞中得以高表达,转染后逐渐从细胞质迁移至细胞核,最后定位于细胞核内.AO/EB荧光染色观察到大量细胞凋亡.结论:成功构建真核表达载体pEGFP-N1-VP3,并成功培养出表达绿色荧光蛋白和凋亡素的SGC-7901稳定细胞株.EGFP-VP3融合蛋白在肿瘤细胞中具有核定位效应,并诱导肿瘤细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丕龙	重庆医科大学附属第一医院消化内科	151	971	16.0	24.0
2	向廷秀	重庆医科大学附属第一医院实验研究中心	53	224	7.0	12.0
3	祖毅		5	27	3.0	5.0
4	吕琳	重庆医科大学附属第一医院消化内科	31	178	8.0	12.0
5	曹红丹	重庆医科大学附属第一医院消化内科	5	12	2.0	3.0
6	刘少宁	重庆医科大学附属第一医院消化内科	6	14	2.0	3.0
7	王丽娟	重庆医科大学附属第一医院消化内科	12	54	4.0	7.0