基因成像体外监测人肿瘤坏死因子相关的诱导凋亡配体基因在肺癌A549细胞中表达的实验研究

• 作者: 刘计存 孙英彩 崔建岭 赵纳 郭志萍 郭志远
• 来源期刊: 中华放射学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达调控 受体 肿瘤坏死因子 基因疗法 诊断显像
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 88-93
• 页数: 6页
• 分类号: R73
• 字数: 4570字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-1201.2009.01.023

摘要

目的 应用作者构建的同时携带人肿瘤坏死因子相关的诱导凋亡配体(hTRAIL)基因和萤火虫荧光素酶(lue)基因的腺病毒双表达载体(Ad-hTRAIL-lue),以luc为报告基因,体外监测hTRAIL基因的表达及其作用.方法 携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒载体(Ad-EGFP)以不同感染复数(MOI)感染肺癌A549细胞,48 h后检测腺病毒载体的感染效率.Ad-hTRAIL-luc分别以不同MOI感染A549细胞,用流式细胞仪48 h后分别检测hTRAIL的表达率及A549细胞的凋亡率;用液闪计数仪检测荧光素酶发光的每分钟计数(cpm).携带luc基因的腺病毒载体(Ad-luc)以不同MOI感染A549细胞,48 h后枪测荧光素酶发光的cpm值.Ad-hTRAIL-luc转染A549细胞后,对各组细胞的hTRAIL表达率及细胞凋亡率结果(自然对数转换后)、cpm值结果进行完全随机设计资料的方差分析,并对hTRAIL表达率及细胞凋亡率的2组数据进行直线相关分析.对Ad-EGFP感染后阳性率及Ad-luc感染后cpm值进行完伞随机设计多样本比较的秩和检验.结果 Ad-hTRAIL-luc转染A549细胞后,各组hTRAIL基因的表达率经自然对数转换后分别为(2.37 ± 0.04)/、(3.16±0.03)/、(3.64±0.03)/、(3.96±0.02)/、(4.24±0.02)/、(4.34±0.02)/,各组间差异具有统计学意义(F=7364,P＜0.01),两两比较差异均有统计学意义(P＜0.01);将各组细胞凋亡率进行自然对数转换后分别为(1.52±0.04)/、(2.93±0.02)/、(3.39±0.02)/、(3.64±0.02)/、(3.86±0.02)/、(4.08±0.02)/、(4.20±0.02)/,各组间差异具有统计学意义(F=12456.7,P＜0.01),两两比较差异均有统计学意义(P＜0.01);各组细胞检测到的cpm值分别为465 561±26 801、1 038 576±29 417、937 655±23 197、786 432±20 028、524 288±16 338、401 566±15 961,各组间差异具有统计学意义(F=1315.94,P＜0.01),差异两两比较均有统计学意义(P＜0.01).hTRAIL基因的表达率和A549细胞的凋亡率之间存在相关关系(r=0.984,P＜0.01).结论 腺病毒双表达载体Ad-hTRAIL-luc可有效将luc及hTRAIL基因传递到肺癌A549细胞中,从分子或细胞水平研究生物体的变化和疾病的进展,监测基因表达及疾病疗效.