人磷脂磷酸水解酶3基因真核表达载体的构建及其对卵巢癌细胞生长的抑制作用

• 作者: 乔玉环 周蔚 张孝艳 张建好 李留霞 王淼 赵先兰 赵国强 郭瑞霞
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人磷脂磷酸水解酶3 卵巢癌细胞系 真核表达载体 转染
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 69-74
• 页数: 6页
• 分类号: R737.31
• 字数: 3937字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2009.01.022

摘要

目的:构建人磷脂磷酸水解酶3(hLPP3)基因的真核表达载体pLenExpress-hLPP3并转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,初步观察重组表达载体对卵巢癌细胞的转染效率、目的基因表达情况及对卵巢癌细胞生长的影响.方法:采用RT-PCR法从正常胎盘组织中提取hLPP3基因,先克隆人克隆载体pGEM-T easy质粒得到pGEM-T-hLPP3,再用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ进行双酶切,切下的hLPP3基因亚克隆入真核表达载体pLenExpress,得到pLenEx-press-hLPP3重组质粒,采用脂质体转染法转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞.实验分为3组:A组为实验组(转染表达hLPP3基因重组质粒)、B组为空质粒对照(转染空表达质粒)、C组为无转染对照.荧光显微镜观察细胞转染效率,实时荧光定量PCR法检测hLPP3 mRNA的表达,化学法测定转染前后细胞上清液中溶血磷脂酸(LPA)含量的变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况.结果:重组表达质粒经限制性酶切鉴定得到与hLPE,基因长度一致(936 bp)的酶切产物,测序分析证实,目的基因序列与GenBank上登录的hLPP3基因(BC009196)序列完全一致.荧光显微镜下见A、B 2组SKOV3细胞内有大量绿色荧光信号,转染率分别为67%和69%,C组细胞中无荧光信号.实时荧光定量PCR测定显示A组细胞中hLPP3 mRNA的相对表达量较B、C组明显增加(A、B、C组分别为0.510 9±0.058 4、0.149 9±0.025 5、0.143 3±0.0181,P<0.05).A组卵巢癌细胞上清液中的LPA含量较B、C组明显下降[A、B、C组分别为(2.37±0.76)μmol/L、(6.71±2.03)μmol/L、(6.84±1.49)μmol/L,P<0.05];流式细胞仪检测显示A组卵巢癌细胞凋亡率明显增加[A、B、c组分别为(30.50±2.12)%、(1.26±0.43)%、(0.10±0.03)%,P<0.05],细胞周期无明显变化.结论:成功构建了表达目的基因hLPP3的重组真核表达载体pLenEx-press-hLPP3,并能高效转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,使细胞中hLPP3基因表达水平明显升高.增强hLPP3基因表达可以降低细胞外LPA水平,诱导细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	乔玉环	郑州大学第一附属医院妇产科	142	898	13.0	21.0
2	郭瑞霞	郑州大学第一附属医院妇产科	140	705	15.0	21.0
3	赵国强	郑州大学微生物学与免疫学教研室	245	807	11.0	16.0
4	李留霞	郑州大学第一附属医院妇产科	92	467	13.0	17.0
5	周蔚	郑州大学第一附属医院妇产科	8	40	4.0	6.0
6	张孝艳	郑州大学第一附属医院妇产科	29	109	5.0	9.0
7	王淼		1	0	0.0	0.0
8	张建好	郑州大学第一附属医院妇产科	34	116	7.0	8.0