华根霉(Rhizopus chinensis)前导肽脂肪酶基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达

• 作者: 喻晓蔚 徐岩 王乐乐
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 华根霉 脂肪酶 克隆 表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 资源环境与生物技术
• 页码范围: 105-110
• 页数: 6页
• 分类号: Q5
• 字数: 4678字
• 语种: 中文

摘要

通过3次PCR程序克隆得到了华根霉(Rhizopus chinensis CCTCCM201021)脂肪酶全基因序列,该基因的开放阅读框长1170bp,不含内含子,编码一个389个氨基酸残基的蛋白质,包括26个氨基酸的信号肽,94个氨基酸的前导序列和269个氨基酸的成熟肽,其推断的氨基酸序列与一些已报道的根霉脂肪酶序列同源性为86%.在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中分泌表达前导肽序列.SDS-PAGE分析表明表达蛋白的分子量约37kD.N-端氨基酸序列分析表明该重组蛋白分泌过程中前导序列N-端的67个氨基酸被切割掉,表达的重组脂肪酶由前导序列C-端的27个氨基酸和成熟肽的269个氨基酸组成.发酵132h后上清中重组脂肪酶的表达量最高,蛋白含量约5.4mg/mL,橄榄油乳化法测水解酶活为161U/mL,其比活比野生型华根霉脂肪酶高约43倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐岩	江南大学教育部工业生物技术重点实验室	233	3264	31.0	46.0
2	喻晓蔚	江南大学教育部工业生物技术重点实验室	24	113	6.0	9.0
3	王乐乐	江南大学教育部工业生物技术重点实验室	1	8	1.0	1.0