重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达

• 作者: 刘兰 刘秀贵 张玲 徐丽慧 洪岸 谢秋玲
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 血小板源性生长因子受体 杆状病毒表达载体系统 昆虫细胞 重组蛋白 MTT法
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 743-748
• 页数: 6页
• 分类号: Q965
• 字数: 5174字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0454-6296.2009.07.005

摘要

[目的]利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β (PDGFRβ)链膜外区与人IgG Fc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性.[方法]采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFastbac-sPDGFRβ/Fc,转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,使目的基因与杆状病毒基因组DNA发生位点特异性重组,获得重组病毒DNA,将其通过脂质体转染昆虫细胞Sf9获得重组病毒.将该重组病毒感染Sf9无血清细胞系,在Sf9细胞中表达sPDGFRβ/Fc,对表达产物进行Western blotting检测和Protein A亲合层析纯化,并进一步通过MTT法检测获得的重组蛋白生物学活性.[结果]重组病毒感染Sf9细胞后,经Western blotting分析,能检测到一条分子量约为97 kDa的特异性条带,与目的蛋白大小相符.通过Protein A亲和层析,获得了纯度达75%以上,表达量为1 μg/mL细胞培养上清的重组融合蛋白,MTT结果显示该重组融合蛋白sPDGFRβ/Fc具有抑制PDGF刺激的Balb/c 3T3细胞增殖的能力.[结论]具有生物活性的重组可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc可在昆虫细胞中成功地得到表达.