碱裂解法提取重组质粒DNA及PCR验证

• 作者: 张梅娟 沙伟 都艳霞
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 碱裂解法 重组质粒 PCR 琼脂糖凝胶电泳
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 35-37
• 页数: 3页
• 分类号: Q93-3
• 字数: 2773字
• 语种: 中文

摘要

目的:筛选获得高质量质粒,为进一步克隆、测序奠定基础.方法:采用常规的碱裂解法从大肠杆菌重组质粒中提取质粒DNA,核酸检测仪测定提取质粒DNA产量和纯度,并用前期DDRT-PCR时采用的引物进行PCR验证性实验,琼脂糖凝胶电泳检测,并对电泳图谱加以分析和鉴定.结果:利用常规的碱裂解法提取重组质粒,通过酚和氯仿的抽提,可以有效地去除蛋白质杂质,用含有Rnase抑制剂的无菌水溶解质粒提取效果最好,得到的质粒DNA无RNA污染,纯度比较高,OD260/OD280比值介于1.8～2.0之间,OD260/OD230比值大于2.0,经PCR反应验证后与预计相符.结论:通过该方法获得的重组质粒纯度和浓度都比较高,且PCR验证与预计相一致,可以满足后续分子生物学实验的要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沙伟	齐齐哈尔大学生命科学与工程学院生物系	160	1730	21.0	34.0
2	张梅娟	齐齐哈尔大学生命科学与工程学院生物系	47	98	5.0	8.0
3	都艳霞	齐齐哈尔大学生命科学与工程学院生物系	3	22	3.0	3.0