基质金属蛋白酶-9靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测

• 作者: 万根平 陈兆鸿 顾晓琼
• 来源期刊: 微循环学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小干扰RNA 基质金属蛋白酶 川崎病 血管内皮细胞
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 基础与实验
• 页码范围: 17-21,前插5
• 页数: 6页
• 分类号: R725.9|R344+.14
• 字数: 4041字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1740.2009.04.006

摘要

目的:构建针对人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)小干扰RNA(siRNA)表达载体, 并观察其对川崎病(KD)血清诱导的血管内皮细胞MMP-9高表达的干扰效果.方法:依据siRNA设计原则设计两对MMP-9基因的特异性干扰序列, 体外分别合成两端含BamHⅠ和 Hind Ⅲ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后与pSilencer3.1-HI neo线性质粒连接,转化DH5α感受态菌株,筛选阳性克隆,提取质粒进行双酶切及琼脂糖电泳鉴定.阳性重组质粒测序.将构建的两个MMP-9 siRNA质粒以KD血清作为诱导因子,用脂质法转染内皮细胞ECV-304,应用RT-PCR 法测定各实验组血管内皮细胞MMP-9 mRNA 表达、Western blot检测各组MMP-9蛋白表达情况,对所构建的MMP-9siRNA质粒进行效应检测.结果:DNA测序证实合成的并被克隆入pSilencer3.1-HI neo表达质粒siRNA插入序列与设计完全符合.KD血清组MMP-9蛋白及mRNA表达水平均较正常血清组明显升高(P<0.05);而所构建的两个MMP-9 siRNA及人血丙种球蛋白均能显著抑制KD血清的上述诱导作用(P<0.05).结论:成功构建的两个MMP-9 siRNA比人血丙种球蛋白更能高效、特异地抑制MMP-9的表达,为进一步研究MMP-9基因对KD冠状动脉病变的影响及其临床应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾晓琼		11	41	4.0	6.0
2	万根平		7	29	4.0	5.0
3	陈兆鸿		2	3	1.0	1.0