构建外源性重组pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体转染兔骨髓基质干细胞

• 作者: 吕松岑 吴莹 安刚 牛丽媛 薛震 赵金东 郭亚山
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: hBMP-7 基因转染 骨髓基质干细胞
• 年，卷（期）: 2009,（40）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7985-7990
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 2002字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.40.036

摘要

背景:在细胞获取、培养、移植等体外环境体系下,骨髓基质干细胞能否有效的应用于局部基因治疗尚不清楚.目的:课题创新性提出构建外源性hBMP-7基因真核表达载体,并期望可提高被转染的兔骨髓基质干细胞诱导成骨能力.设计、时间及地点:细胞-基因学体外观察,于2006-07/2007-07在哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心完成.材料:人健康新鲜胎盘组织由哈尔滨医科大学附属二院妇产科提供,产妇知情同意.健康雄性新西兰大耳白兔1只,由哈尔滨医科大学动物中心提供.方法:从人胎盘组织中克隆出hBMP-7基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体.从兔骨髓中分离培养骨髓基质干细胞,分为3组:pcDNA3.1-hBMP-7转染组、空载体pcDNA3.1转染组、未转染组.转染前1 d取第2代骨髓基质干细胞5×106个,接种到60 mm3含无抗生素培养基的培养皿中进行转染.主要观察指标:使用RT-PCR、免疫组织化学等方法检测hBMP-7在骨髓基质干细胞中的表达,检测各组细胞碱性磷酸酶、胶原、骨钙蛋白的合成情况.结果:转染72 h后,pcDNA3.1-hBMP-7转染组于1.3 kb处出现特异性条带,细胞胞浆有棕色的颗粒出现,另2组均呈阴性.pcDNA3.1-hBMP-7转染组骨髓基质干细胞碱性磷酸酶活性于转染后第2天显著增高,第8天达峰值,各时间点pcDNA3.1-hBMP-7转染组骨髓基质干细胞碱性磷酸酶活性、羟脯氨酸合成量、骨钙蛋白含量均明显高于其他2组(P<0.05或0.01).结论:实验成功构建了pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体.结局证明了外源性hBMP-7基因可在兔骨髓基质干细胞中充分、高效表达,并且这种外源性hBMP-7基因具备促进兔骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕松岑	哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科	44	359	11.0	18.0
2	牛丽媛	哈尔滨工业大学物理诊断科	5	22	2.0	4.0
3	吴莹	哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科	14	79	5.0	8.0
4	安刚	哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科	4	7	2.0	2.0
5	薛震	哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科	11	89	3.0	9.0
6	赵金东	首都医科大学附属友谊医院骨科	3	10	2.0	3.0
7	郭亚山	哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科	4	10	2.0	3.0