MHC Ⅱ类转激活因子基因的重组腺病毒载体的构建

• 作者: 吴红玉 张敏敏 李兆申 杨骅 金晶
• 来源期刊: 中华胰腺病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰腺肿瘤 基因 MHCⅡ类 基因疗法
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 399-401
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2360字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2009.06.012

摘要

目的 构建含有主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子激活物(CⅡTA)基因的重组腺病毒载体.方法 回收CⅡTA的PCR产物插人pUC57中,用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,U-Gene凝胶回收纯化3300bp目的基因片段.用EcoR Ⅰ和sal Ⅰ双酶切质粒载体pShuttle-GFP-CMV,用T4DNA连接酶将上述目的基因片段与pShuttle-GFP-CMV片段连接,得到穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-C Ⅱ TA,并经Kpn Ⅰ单酶切及测序鉴定.Ⅰ-Ceu Ⅰ/Ⅰ-See Ⅰ双酶切处理,回收目的片段,将pAdxsi载体片段和插入片段进行酶连接,得到腺病毒质粒pAdxsi-GFP-C Ⅱ TA,经Xho Ⅰ酶切鉴定后转染HEK293细胞并培养出毒.扩增、纯化重组腺病毒AdCⅡTA,并测定病毒滴度.结果 重组穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-C ⅡTA经Kpn Ⅰ单酶切及测序分析,证实与GeneBank中公布的小鼠CⅡTA(NM_007575)序列完全相符.重组腺病毒pAdxsi-GFP-C Ⅱ TA构建成功后在HEK293细胞中包装产生的重组腺病毒AdC Ⅱ TA对HEK293细胞有致病作用.经多次重复感染并纯化后,病毒滴度达2.0×10~(11)PFU/ml.结论 含小鼠CⅡTA基因的重组腺病毒已成功构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兆申	第二军医大学长海医院消化内科	1030	7581	34.0	55.0
2	金晶	第二军医大学长海医院消化内科	47	145	7.0	8.0
3	杨骅	第二军医大学长海医院消化内科	43	346	10.0	16.0
4	吴红玉	第二军医大学长海医院消化内科	32	134	8.0	9.0
5	张敏敏	第二军医大学长海医院消化内科	20	102	6.0	9.0