猪脑心肌炎病毒SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立

• 作者: 刘棋 屈素洁 施开创 李刚 熊毅 许瑞胜 陈汉忠 陈进喜
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 脑心肌炎病毒 猪 荧光定量PCR SYBR Green I
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 135-139
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 3830字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.02.008

摘要

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了l对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green I real-time PCR方法.检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;对初始模板的检出下限为1×101copies/μL,比常规PCR方法高100倍;与其他猪源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于3%.应用建立的方法检测了17份临床可疑病例的心、脑组织样本,结果1份为阳性.表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析.