细菌革兰双检荧光定量PCR方法检测新生儿败血症

• 作者: 吴亦栋 尚世强 李建平 楼金吐 陈理华 陈露萍
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脓毒症 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 聚合酶链反应 细菌学技术 要儿,新生
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 临床实验诊断研究
• 页码范围: 547-551
• 页数: 5页
• 分类号: R72
• 字数: 4388字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2009.05.014

摘要

目的 建立细菌革兰阴、阳性菌双重实时荧光定量检测体系,探讨其检测败血症的临床应用价值.方法 分析细菌16SrRNA基因序列,在高度保守区自行设计通用引物和革兰阴性和阳性分型探针,选取临床较常见的35株菌株进行细菌革兰双检实时荧光定量PCR方法检测;对临床疑为败血症的512例新生患儿分别做细菌革兰双检荧光定量PCR和血培养检测.结果 细菌革兰双检荧光定量PCR具有较好的敏感性和特异性,能稳定检测到10 CFU左右细菌数.35株菌株进行细菌革兰双检荧光定量PCR检测,均为阳性,且革兰阴、阳性菌能正确分型和定量.巨细胞病毒、EB病毒、乙肝病毒、新型隐球菌及白色念珠菌、人基因组DNA及空白对照均为阴性.对临床疑为败血症的512份新生患儿标本中,革兰双检荧光定量PCR检测血标本阳性率8.20%(42/512),血培养阳性率6.25%(32/512),前者明显高于后者,差异具有统计学意义(χ<'2>=8.10,P<0.01),30例非感染性疾病同期患儿血标本革兰双检荧光定量PER及细菌培养均为阴性.若以血培养作为对照,细菌革兰双检荧光定量PCR方法的诊断敏感度为100%,特异度为97.92%,准确性98.05%.结论 建立了用通用引物和分型双荧光探针的细菌革兰双检荧光定量PER方法.其检测快速、准确,具有很大的临床推广价值.