中棉所36均一化全长cDNA文库的构建与鉴定

• 作者: 刘俊杰 吴东 喻树迅 宋美珍 范术丽
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 花发育 均一化 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 602-607
• 页数: 6页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2009.00602

摘要

以短季棉中棉所36(CCR136)顶分生组织和花蕾为材料,以DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术与SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)建库技术相结合,构建CCRI 36花发育期均一化全长cDNA文库.经检测原始文库滴度为1.7x106cfu mL-1.随机挑取100个克隆,利用PCR方法测得文库重组率达100%,插入片段平均长度为1.2 kb.以两个高丰度表达基因Histon3和UBQ7为探针,进行虚拟Northern blot检测显示,其丰度在均一化cDNA中均明显降低,说明均一化效果显著,为节约筛库成本和EST有效测序奠定了基础;同时,利用常规PCR扩增技术从cDNA文库中筛选阳性信号,获得了花发育相关蛋白基因.初步证实CCRI36花发育期均一化全长cDNA文库构建成功,为深入研究棉花花发育机理及发掘与早熟相关的功能基因奠定了基础.