Red/ET重组AHBA生物合成基因簇打靶载体的构建与鉴定

• 作者: 张会图 张金池 王以光 王广林
• 来源期刊: 安徽师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Red/ET重组 AHBA基因簇 打靶载体 链霉菌
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 569-574
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 2740字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2443.2009.06.014

摘要

为确定3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)生物合成基因簇在链霉菌中与次生代谢产物的关系,运用PCR技术,从33株AHBA合酶基因阳性菌株扩增与AHBA生物合成基因簇中编码AHBA合酶(A)、氧化还原酶(O)、磷酸化酶(P)基因,获得24株AOP基因阳性菌株.根据靶基因A基因下游和P基因上游同源序列设计50 bp引物,中间插入卡那霉素抗性基因的DNA片段,进行PCR,获得外源DNA片段.经过电转化,将外源DNA片段和pKC1139-AOP重组质粒共转入含重组酶质粒大肠杆菌HS996/ pSC101-BAD-gba-(Tet).在Red重组酶的作用下,外源DNA片段与重组质粒pKC1139-AOP上的AHBA基因簇的同源区域重组,构建了AHBA基因簇打靶载体.研究显示了Red/ET重组工作效率高、操作简单、精确的优点,可大大缩短构建打靶载体的时间.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张金池	南京林业大学森林资源与环境学院	292	4588	33.0	50.0
2	王广林	南京林业大学森林资源与环境学院	9	67	3.0	8.0
6	张会图	中国协和医科大学医药生物技术研究所	1	2	1.0	1.0
7	王以光	中国协和医科大学医药生物技术研究所	1	2	1.0	1.0