人表皮生长因子基因转染原代角质形成细胞

• 作者: 刘进言 周建大 李文波 王少华 罗成群 胡媛 谢慧清 谭建湘 陈勇
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 皮肤 表皮生长因子 基因 角质形成细胞 质粒
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 184-188
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3436字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2009.02.008

摘要

目的:将带信号肽的人表皮生长因子基因转染原代成人角质形成细胞, 证实细胞活性及hEGF的有效表达, 为后期的皮肤修复研究打下基础.方法:先酶切验证pcDNA3.1-hEGF, 后消化成人皮肤组织, 以Defined Keratinocyte-SFM(DKSFM)传代培养角质形成细胞并鉴定, 脂质体转染质粒pcDNA3.1-hEGF入细胞, 转基因细胞培养48 h后作RT-PCR和Western-blot分析, 上清分别进行放射免疫测定和MTT测定.结果:质粒pcDNA3.1-hEGF上的hEGF序列经测序证实,双酶切后获得约230 bp和5.4 kb条带;成人角质形成细胞体外培养可快速稳定增殖, 转hEGF基因细胞经RT-PCR扩增出一条约230 bp的特异性条带, Western-blot检测到hEGF表达明显升高;放射免疫法和MTT实验证实转基因细胞有稳定的hEGF蛋白分泌.结论:质粒pcDNA3.1-hEGF在脂质体介导下成功转染成人皮肤角质形成细胞, 转基因细胞能分泌有生物活性的EGF;体外培养的成人皮肤角质形成细胞可见少量EGF分泌.