禽流感、新城疫可目视化诊断蛋白芯片的制备及初步应用

• 作者: 包红梅 杨忠苹 武嘉男 王煜 王秀荣 石霖 蔡冬冬 陈化兰 陶启蒙
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 禽流感 新城疫 可视化 诊断 蛋白芯片
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 诊断技术
• 页码范围: 60-64
• 页数: 5页
• 分类号: Q789
• 字数: 3074字
• 语种: 中文

摘要

本研究制备了可以同时鉴别诊断禽流感(AI)、新城疫(ND)2种禽病血清抗体的可视化蛋白芯片.以超速离心法和蔗糖密度梯度法分别纯化了2种病毒蛋白抗原,用点样缓冲液稀释后点于醛基修饰的片基上,制备蛋白芯片;将芯片与待检血清杂交后,再与胶体金标记的二抗杂交,银染显色后根据灰度值判定结果,从而建立了2种禽病的可视化蛋白芯片鉴别诊断方法.采用该方法对18份现地血清样品进行初步检测,结果显示该芯片可特异性的与相应的抗体杂交,无交叉反应,而且呈现较强的杂交信号,其信号灰度值在阳性血清浓度为50μg/mL～300μg/mL范围内成线性关系(Y=0.426X+4.225).用该芯片方法和琼扩(AGP)抗体检测方法对18份现地样品进行符合率检测,结果表明该可视化蛋白芯片具有很好的特异性,并且检测灵敏度为是AGP方法的400倍以上.研究表明该方法可用于同步鉴别2种禽病,是一种有效的抗体检测新方法.