炭疽菌保护性抗原受体结合区的表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 刘纯杰 姜娜 展德文 李家奎 王艳春 邱炎 陶好霞 韩秀萍
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 炭疽杆菌 保护性抗原 受体结合区 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 94-98,108
• 页数: 6页
• 分类号: Q93
• 字数: 4755字
• 语种: 中文

摘要

原核表达炭疽杆菌保护性抗原受体结合区并制备该蛋白的多克隆抗体.从炭疽芽胞杆菌A16R中经PCR扩增得到了炭疽菌保护性抗原(PA)受体结合区基因,即PA的第四结构域(PA-D4),将其克隆至含有6×His编码序列的原核表达载体pET-2b(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;用HiTrapTM Chelating HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步鉴定;以纯化后的蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔制备该蛋白的多克隆抗体;用ELISA和Western blot检测抗血清.结果表明,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度可达90%以上;制备了针对PA-D4融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1∶ 102 400;其抗体能特异性识别内源性的PA.PA-D4重组蛋白及其多克隆抗体的获得,为后续研究其功能和炭疽疫苗免疫保护机制奠定了基础.