应用基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法检测LRRK2基因的单核苷酸多态性

• 作者: 丁一冰 丁新生 丁海霞 卜莹 周国华 孙晓如 汪维鹏 王枫 邓黎丽 黄乐群
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: ALM-ASA法 LRRK2 单核苷酸多态 多重PCR
• 年，卷（期）: 2009,（14）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2716-2720,2734
• 分类号: R741
• 语种: 中文

摘要

目的:应用基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法(Adapter Ligation-mediated Allele-specific Amplification,简称ALM-ASA)技术,检测与帕金森病(PD)发病相关的LRRK2基因中的4个SNP位点(6055GA,7153GA,4321CT和2264CT),探讨该法用于筛查帕金森痛相关SNP位点的可行性,研究多个SNP位点同时检测的准确性和可靠性.方法:运用ALM-ASA法原理,改进使用多重PCR法代替单一预扩增法,使用4对引物在单管中预扩增含所待测SNP位点的四段片段,通过酶切、酶连和PCR特异性扩增检测判断SNP的类型.经PCR体外定点突变实验制备的相应位点的突变阳性片段,检验方法的准确性和可靠性.结果:采用该法成功测定了20名PD病人和20名健康中国人的LRRK2基因中最受关注的4个SNP位点的多态性.并随机对其中10分样本的检测结果以测序法检测进行验证,结果完全一致.结论:ALM-ASA法极大提高了PCR反应的特异性,是一种准确、可靠,且费用低廉的SNP筛查方法,可推广应用于临床和实验室进行与PD有关的单核苷酸多态性的筛查检测.