鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定

• 作者: 宋凌云 崔保安 胡功政 贾艳艳 郭显坡 陈红英
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡 α干扰素 克隆 原核表达 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 页码范围: 40-43
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 字数: 3687字
• 语种: 中文

摘要

通过PCR技术从罗曼鸡肝脏基因组中扩增鸡α干扰素(ChIFN-α)全基因,并克隆和测序.序列分析表明,ChIFN-α基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp,利用基因重组技术构建了重组质粒,使ChIFN-α置于原核表达载体pQE30的T5启动子下并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag 融合.经酶切和PCR鉴定,DNA测序证实重组质粒pQEChIFN-α构建正确;将pQEChIFN-α转化大肠杆菌M15感受态细胞,用IPTG诱导表达.SDS-PAGE和Western blot证实表达出分子质量为19.80 kDa的融合蛋白.表达的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性处理后,在Vero细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1.16×103 U/mg.本研究成功表达了ChIFN-α,表达的重组蛋白具有一定的生物活性.