细胞荧光素酶报告基因试验受CpG岛甲基化状态影响

• 作者: 张宝珍 邓大君
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因冈报告 启动区(遗传学) 钙黏着糖蛋白类 CpG岛 甲基化
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 601-606
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 3975字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2009.07.015

摘要

目的 研究细胞内源性上皮型钙黏素基因(E-cadherin,CDH1)启动子CpG岛甲基化状态是否影响报告基因试验的结果 .方法 甲基化特异性PCR法测定8种人肿瘤细胞系CDH1启动子CpG岛甲基化状态,免疫印迹法测定其蛋白表达;根据该基因启动子-73位A/C多态和单倍体型构建2组长短不同的CDH1启动子-荧光素酶报告基因[pGI3-A(-73)/-C(-73)和pGL3-H1/-H4],活性差异采用t检验进行统计分析.结果 (1)CDH1在MCF7、MKN74、PC-3和AGS细胞中COG岛末甲基化,除AGS外均存在CDH1表达;在HeLa、BGC823、A549和RKO细胞中CpG岛甲基化并且无表达;(2)在CDH1未甲基化细胞系MCF7、MKN74、PC-3和AGS中pGL3-C<,(-73)报告基因活性(分别为:0.78±0.10、0.17±0.01、0.11±0.01、1.19±0.18)均显著高于pGL3-A(-73)报告基因活性(分别为:0.30±0.08、0.07±0.01、0.07±0.01、0.39±0.04)(t值分别为:-6.298、-12.349、-8.128、-7.388,P值均<0.01),而在CDH1甲基化细胞中则相反[HeLa、BGC823、A549和RKO细胞中pGL3-C(-73)报告基因活性分别为:0.09±0.02、0.13±0.02、0.05±0.01、0.01±0.00,pGI3-A(-73)活性分别为:0.16±0.01、0.25±0.01、0.11±0.03、0.03±0.00,pGL3-C(-73)活性低于pGL3-A(-73),t值分别为:5.958、11.189、3.661、13.866,P值均<0.05];(3)在MKN74和RKO细胞中,pGL3-H1/-H4的启动子活性分别为1.57±0.23/0.94±0.06和0.38±0.02/0.50±0.04,差异亦存在统计学意义(t值为4.577和-4.915,P值为0.010和0.003),并且在两种细胞巾活性相反.结论 细胞内源性目的 基因CpG岛甲基化状态对报告基凶试验结果 可能有重要影响,高活性基因型的启动子也是容易受抑制的启动子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓大君	北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院北京市肿痛防治研究所恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室	14	191	5.0	13.0
2	张宝珍	北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院北京市肿痛防治研究所恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室	2	9	1.0	2.0