牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆与原核表达

• 作者: 于龙政 张守发 薛书江 金春梅
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 牛瑟氏泰勒虫 P23表面蛋白基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: S855.9
• 字数: 3115字
• 语种: 中文

摘要

构建牛瑟氏泰勒虫P23基因片段原核重组表达质粒,表达重组蛋白.采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因,将扩增产物与pMD18-T-Simple载体连接,测序,验证扩增产物.将P23基因片段克隆到载体pGEX-4T-3上,经酶切分析、PCR鉴定后,IPTG诱导表达,最后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定表达产物.结果表明克隆的P23基因片段为684 bp,重组质粒pGEX-4T-3/P23构建成功;SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量约为58 ku;Western blotting分析结果显示,与牛瑟氏泰勒虫阳性血清发生反应,而与牛瑟氏泰勒虫阴性血清无反应,表明牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白具有良好的抗原性和特异性,提示可以利用融合蛋白来建立检测抗体的间接EUSA诊断方法.