Asia 1型口蹄疫病毒多表位基因的原核表达及ELISA 检测方法的建立

• 作者: 李霄 田明尧 郑敏 金宁一 金扩世 霍晓伟 韩松 鲁会军
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫 亚洲1型 多表位基因 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 45-49
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6|R446.61
• 字数: 3769字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2009.01.009

摘要

根据国内流行的Asia 1型口蹄疫病毒的基因组特性,合成了Asia 1型口蹄疫病毒2个流行毒株VP1基因的5个抗原表位,并将其克隆到pMDl8-T载体上,再按设计的酶切位点连接,构建出Asia 1型口蹄疫病毒VP1双拷贝基因片段(VPlAsia).然后,将VP1Asia基因连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建了重组表达质粒pET-28a-VPlAsia,接着将其转入BL21茵中进行原核表达.以纯化的表达蛋白作为抗原检测了牛Asia 1型口蹄疫病毒阳性血清.结果显示,VPIAsia基因在大肠杆菌中获得了高效表达,以纯化的VPIAsia蛋白作为抗原建立了检测Asia 1型口蹄疫病毒抗体的ELISA方法.以建立的ELISA方法和标准Asia 1型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒对30份临床样品进行了检测,两种检测方法的阳性率分别为90.0% (27/30)和93.3%(28/30),符合率为89.7%(26/29).本研究为组装Asia 1型口蹄疫病毒抗体ELISA诊断试剂盒奠定了基础.