猪传染性胃肠炎病毒特异性受体APN 功能区的初步鉴定

• 作者: 任晓峰 刘博奇 尹杰超 张赟硕 李一经 李广兴 王君伟 王衡
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪氨肽酶N 蛋白表达 受体
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 21-23
• 页数: 3页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3017字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7034.2009.06.009

摘要

试验为了构建猪氨肽酶N (pAPN) 不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化,经Western-blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区.试验构建重组了质粒pET30a-pAPN1(106～669 nt)、pET30a-pAPN2(670～1 044 nt)、pET30a-pAPN3(1 045～1 773 nt)、pET30a-pAPN4(1 774～2 328 nt)、pET30a-pAPN5(2 329～2 889 nt)、pET30a-pAPN6(106～1 044 nt)、pET30a-pAPN7(1 774～2 889 nt);转化宿主菌BL21 (DE3) 细胞,IPTG诱导表达蛋白,包涵体经SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳回收纯化;用 Western-blot 、ELISA方法经抗pAPN多克隆抗体初步筛选出pAPN受体功能区.结果表明:pET30a-pAPN2、pET30a-pAPN3、pET30a-pAPN6、pET30a-pAPN7蛋白均以包涵体形式表达并纯化.pET30a-pAPN3、pET30a-6、pET30a-7能与抗pAPN多抗产生特异性反应.经抗pAPN多抗筛选初步鉴定出其主要抗原功能区在36～153 aa、349～591 aa、592～963 aa内.