大鼠N型钙通道ⅢP区原核表达、纯化及活性研究

• 作者: 周玉娟 张荣庆 谢莉萍
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 纯化 表达 N型钙通道
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1569-1577
• 页数: 9页
• 分类号: Q78
• 字数: 3646字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00351

摘要

高保真PCR克隆出编码大鼠海马组织N型钙通道α1B亚基ⅢP区的DNA序列,分别与表达载体pET28b和pGEX-4T-1连接,转化入能补充稀有密码子tRNAs的大肠杆菌Rosetta菌株中,通过优化表达条件,实现了高效诱导表达.再通过低温诱导,将包涵体用尿素溶解再稀释后透析法复性、酶切、亲和柱层析等方法得到较纯的可溶性目的蛋白HIS-Cav22P、GST-Cav22P和Cav22P,紫外吸收光谱检测实验证明了重组蛋白HIS-Cav22P能和钙离子可逆地结合.最后通过GST沉降实验证明了芋螺毒素SO3与Cav22P存在体外相瓦结合作用.上述结果为揭示芋螺毒素SO3特异性阻断大鼠海马组织N型钙流的分子机制提供了直接的依据,也为建立筛选新的非吗啡型天然镇痛药物的技术平台提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张荣庆	清华大学生物科学与技术系	38	396	12.0	19.0
5	谢莉萍	清华大学生物科学与技术系	29	91	4.0	8.0
9	周玉娟	清华大学生物科学与技术系	2	0	0.0	0.0