重组泡球蚴Em18蛋白不同纯化方法的比较

• 作者: 卢晓梅 吕国栋 林仁勇 温浩 王俊华 王慧 王星 王红丽
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 泡球蚴 Em18重组蛋白 表达和纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 45-48
• 页数: 4页
• 分类号: Q51|Q503
• 字数: 3723字
• 语种: 中文

摘要

目的:比较不同方法纯化重组泡球蚴Eml8的效果.方法:进一步对BL21-pET41a-Em18重组菌的诱导表达条件进行摸索优化,采用改良的超声程序破碎大肠杆菌细胞,分别经不同的纯化方法进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析,Western blot进行活性鉴定.结果:①在菌液OD_(600)为0.8～1.0,加IPTG终浓度为1 mmol/L,37℃诱导3h,rEm18-GST重组蛋白得到成功高表达,在相对分子量为50kDa处有表达条带.②超声程序为:工作3 s,间歇4s,功率200-300W,超声体系中加入溶菌酶和蛋白酶抑制剂作用,可促进大肠杆菌细胞的破碎,降低目的蛋白的降解;加入终浓度为1%的Tritot-X100作用可增加融合蛋白的可溶性.③通过比较不同方法纯化重组泡球蚴Eml8的效果表明采用单纯His柱纯化可获得浓度高、纯度高的rEm18-GST重组蛋白.Western blot分析表明该蛋白能与泡型包虫病(AE)患者血清特异性反应.结论:建立了一种纯化原核表达Em18融合蛋白的较为经济和有效的方法,得到大量有生物学活性的Em18融合蛋白,为包虫病诊断试剂盒的研制奠定基础.