肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化定量检测研究

• 作者: 张丽霞 张寄南 束永前 潘世扬 穆原 谢而付 赵文君 陈丹 陈进步 高丽
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: 实时荧光定量MSP 肺肿瘤 血浆DNA APC基因 DNA甲基化
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 384-389
• 页数: 6页
• 分类号: R737.9
• 字数: 5188字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2009.04.009

摘要

背景与目的:APC基因编码的蛋白参与信号转导途径,大量研究证实APC启动子区的高甲基化在肿瘤的发生发展中起重要作用.本研究建立血浆APC基因实时荧光定量甲基化特异性基因扩增(methylation-specific PCR,MSP)检测方法,并对临床肺癌患者血浆进行检测,以确定该方法在肺癌诊断中的应用价值.方法:将APC基因启动子甲基化阳性肺癌细胞株NCI-H460细胞用有限稀释法获取单个集落形成的细胞,以经典的酚-氯仿法提取细胞DNA.并用MSP对APC基因甲基化进行验证.紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μL健康人血浆中,得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟肺癌及肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者血浆中提取DNA,对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰;以模拟血浆样品作为标准品,采用外标准曲线法对各种血浆样品中APC甲基化进行定量分析.结果:所建立的实时荧光定量MSP检测方法的线性范围为1.5×102～1.5×105拷贝/mL,用该方法检测甲基化肿瘤细胞的DNA其最低检测限为1.5×102拷贝/mL.78例肺癌患者有40例组织中检测出APC基因甲基化阳性,其中的19例(47.5%)肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化阳性,APC甲基化浓度为1.67×102～6.78×103拷贝/mL,中位浓度为1.60×103拷贝/mL.38例组织阴性的肺癌患者、31例肺部良性疾病患者和23例健康者的血浆APC基因启动子甲基化均为阴性.结论:实时荧光定量MSP检测血浆APC基因甲基化在肺癌诊断方面具有潜在应用价值.