乙酰肝素酶重组慢病毒转基因和siRNA干扰质粒的构建及鉴定

• 作者: 姚德生 张玮 李力 王琪 陈泓
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 乙酰肝素酶 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2009,（20）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3836-3840
• 分类号: R730.231
• 语种: 中文

摘要

目的:构建乙酰肝素酶重组慢病毒转基因和siRNA干扰质粒,为探讨HPSE在在肿瘤浸润转移过程中的分子机理奠定基础.方法:乙酰肝素酶cDNA全长扩增和最佳siRNA干扰片段筛选分别采用PCR和Real-time PCR方法,慢病毒系统载体分别使用pWPI和siRNA pSico系统,采用限制性內切酶快速连接方法联接目的基因和最佳最佳siRNA干扰片段,表达载体鉴定均采用核苷酸序列测定,HPSE重组慢病毒表达质粒和siRNA片段细胞转染采用脂质体转染法.结果:成功扩增乙酰肝素酶全长并连接入pWPI载体构建成重组表达载体HPSE-pWPI,重组质粒测序结果显与HPSE基因的同源性达99%.转染2937后有HPSE基因的表达.筛选出最佳siRNA干扰片段为HPSE-1222并成功插入pSico栽体,构建成重组表达载体HPSE-siRNA pSico,重组载体测序显示与构建的shRNA结构序列完全一致.结论:成功采用慢病毒载体系统构建了乙酰肝素酶重组慢病毒转基因和siRNA干扰质粒,为探讨HPSE在在肿瘤浸润转移过程中的分子机理奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李力	广西医科大学肿瘤医院妇瘤科	377	1810	20.0	26.0
2	张玮	广西医科大学肿瘤医院妇瘤科	149	564	13.0	17.0
3	王琪	广西医科大学肿瘤医院妇瘤科	87	263	8.0	11.0
4	姚德生	广西医科大学肿瘤医院妇瘤科	90	398	11.0	15.0
5	陈泓	广西医科大学肿瘤医院妇瘤科	11	19	2.0	4.0