Wnt7b重组反转录病毒载体的构建及其在C3H10T1/2中的表达

• 作者: 徐选福 曹谊林 李小艳 李晶华 胡洪亮 陈婷婷
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: Wnt7b 加强型绿色荧光蛋白 C3H10T1/2 骨生成
• 年，卷（期）: 2009,（20）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3938-3941
• 页数: 4页
• 分类号: R349.83
• 字数: 4334字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.20.029

摘要

背景:诱导骨髓基质干细胞成骨条件的优化与探讨是再生医学研究的热点.前期实验发现Wnt7b在骨发育中的作用,此次实验是前期工作的延续.目的:构建Wnt7b重组反转录病毒载体,观察其在C3H10T1/2中的表达.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-01/2008-08在华盛顿大学医学院和同济大学附属第十人民医院中心实验室完成.材料:pXy-Wnt7b购于ATCC公司,载体pCIG-IRES-EGFP,pLef-Luciferase.pCMV-Rennilla.反转录病毒载体pSFG和包装细胞GP293由华盛顿大学医学院提供.方法:用多步亚克降技术构建目的基因Wnt7b和标记基因加强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescentprotein,EGFP)双表达重组反转录病毒载体pSFG-Wnt7b-IRES-EGFP,在条件培养液中经GP293包装,并任常规培养液中释放出假病毒并将其转染C3H10T1/2细胞,检测成骨活性诱导中的作用和荧光素酶报告基因检测信号转导通路.主要观察指标:①Wnt7b重组反转录病毒转染C3H 10T1/2细胞的表达.②wnt7b诱导C3H 10T1/2碱性磷酸酶生成分析.③Wnt7b信号转导分析.结果:构建日的基因的Wnt7b和标记基因EGFP双表达重组反转录病毒载体能够高效地表达,转染C3H10T1/2细胞后能诱导碱性磷酸晦的生成.Wnt7b信号转导分析可见Wnt7b成骨作用通过Noncanonical途径.结论:Wnt7b在C3H10T1/2中能高效表达,能显著诱导骨发育的重要标志--碱性磷酸酶的生成,Noncanonical途径在其中起重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晶华	同济大学附属第十人民医院检验医学中心实验室	17	71	6.0	8.0
2	徐选福	同济大学附属第十人民医院检验医学中心实验室	22	167	7.0	12.0
3	李小艳	同济大学附属第十人民医院检验医学中心实验室	21	95	5.0	9.0
4	陈婷婷	同济大学附属第十人民医院内科	6	53	3.0	6.0
5	曹谊林		1	1	1.0	1.0
6	胡洪亮	同济大学附属第十人民医院内科	2	2	1.0	1.0