脑源性神经营养因子基因沉默对HeLa细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 孙春艳 王雅丹 胡豫 褚章波 郭涛 黄靖
• 来源期刊: 中华病理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脑源性神经生长因子 HeLa细胞 RNA干扰 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 实验病理学
• 页码范围: 686-690
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4077字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2009.10.009

摘要

目的 以高表达脑源性神经营养因子(BDNF)的官颈癌细胞系HeLa细胞为模型,筛选针对BDNF基因的有效干扰RNA序列,并观察BDNF基因沉默对HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计和构建两个针对人BDNF基因的siRNA真核表达载体,经酶切鉴定和DNA序列分析鉴定后用脂质体Lipofectamine 2000介导转染,将空载体质粒pGenesil-1和两个重组质粒pGenesil-shRNA-BDNF1、pGenesil-shRNA-BDNF2分别转染人人HeLa细胞(依次命名为P_0、P_1和P_2组);采用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测BDNF表达的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖水平;流式细胞仪和Hoechest 33258染色检测细胞凋亡.结果 成功构建了针对BDNF的siRNA真核表达载体.P_1组与未转染、P_0、P_2组相比,BDNF mRNA表达水平(F=48.19,P<0.01)和BDNF蛋白表达水平(F=13.74,P<0.01)均明显降低,P_2组则未达实验预期的干扰目的 (P>0.05).通过MTT实验,发现P_1组细胞生长速度明显减慢,增殖高峰后移;流式细胞术检测证实早期凋亡率P_1组[(53.4±4.2)%]明显高于未转染组[(0.8±0.4)%]、P_0组[(5.1±1.8)%]和P_2组[(7.9±2.4)%;F=269.77,P<0.01].结论 BDNF基因高表达于官颈痛细胞系HeLa细胞,BDNF基因沉默能明显增加HeLa细胞的凋亡并抑制其增殖,提示BDNF基因可能成为恶性肿瘤治疗的新靶点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙春艳	华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所	40	252	9.0	14.0
2	胡豫	华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所	154	742	14.0	21.0
3	郭涛	华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所	61	388	11.0	18.0
4	王雅丹	华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所	24	118	6.0	10.0
5	黄靖	华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所	29	172	7.0	12.0
6	褚章波	华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所	3	8	1.0	2.0