多功能转录因子CTCF重组质粒构建及其表达鉴定

• 作者: 孙芝琳 张军哲 杨文理 武静 蒋磊 覃扬
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: CTCF结合因子 融合蛋白 表达
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3623字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2009.01.001

摘要

目的 构建人CTCF cDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体,纯化融合蛋白并进行鉴定.方法 以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板,分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF-C,转化大肠杆菌BL21,酶切、测序鉴定;优化IPTG诱导表达条件,并对亲和层析纯化的GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF进行Far-West-ern blot鉴定.结果 重组质粒经双酶切和测序鉴定证实构建成功.GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C均在大肠杆菌中成功诱导表达,融合蛋白经亲和层析纯化获得纯化蛋白.各纯化蛋白经SDS-PAGE和Far-Western blot鉴定,均为诱导表达蛋白质.结论 成功构建了GST融合表达CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C的重组质粒,对融合蛋白表达条件进行了优化.获得了高效表达的GST融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	覃扬	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	27	139	7.0	10.0
2	孙芝琳	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	14	101	6.0	9.0
3	杨文理	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	7	27	3.0	5.0
4	蒋磊	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	8	18	2.0	4.0
5	武静	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	3	8	2.0	2.0