双效表达载体的构建及其U6启动子的功能效率鉴定

• 作者: 杨彬 柳纪省 温峰琴 胡永浩 项海涛
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: RNAi 共表达载体 U6启动子 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 82-85,90
• 页数: 5页
• 分类号: S8
• 字数: 2223字
• 语种: 中文

摘要

利用pBudcE4.1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体,为双效疫苗的研制提供新的研究思路.以含U6启动子的载体为模板,PCR扩增得到U6启动子,用其置换载体pBudcE4.1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体.用干扰绿色荧光蛋白表达的方法鉴定重组载体中的U6启动子能否启动shRNA的表达.经PCR扩增、双酶切鉴定及DNA测序证明成功构建了载体pBudcE4.1-U6.用干扰载体pBudcE4.1-U6-eGFPshRNA与含eGFP的载体共转染293T细胞后,荧光显微镜观察显示eGFP的表达量下降;流式细胞仪检测细胞的转染效率降低.研究结果证明U6启动子正常发挥作用. 成功构建RNAi与蛋白共表达载体,为利用该载体研制动物双效疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳纪省		39	235	9.0	14.0
2	胡永浩	甘肃农业大学动物医学院	96	391	9.0	16.0
3	温峰琴	甘肃农业大学动物医学院	36	45	4.0	5.0
4	项海涛	甘肃农业大学动物医学院	16	16	3.0	3.0
8	杨彬		1	2	1.0	1.0