survivin shRNA重组腺病毒的构建及其对人肺癌细胞A549的作用

• 作者: 李昌武 梁念慈 王润秀 覃燕梅 谢富华
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: survivin 重组腺病毒 RNAi
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 277-281
• 页数: 5页
• 分类号: R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2009.04.005

摘要

目的 构建携带人生存素survivin短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)表达载体的重组腺病毒,以此介导小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)药物对人A549细胞肺癌的治疗,为下一步动物实验研究提供基础.方法 将前期实验中构建并筛选的重组质粒pShune-survivin与携带LacZ标签的腺病毒骨架质粒共转染HEK-293 T细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-survivin;经PCR鉴定并测定病毒滴度;β-gal染色检测病毒时人肺癌细胞A549的感染效率;MTT实验和流式细胞术检测其对A549细胞的作用;半定量RT-PCR检测RNAi效果;Hoeehst染色观察凋亡情况.结果 PCR证实重组腺病毒Ad-survivin构建成功;β-gal染色表明感染效率明显;A549细胞增殖受到抑制并阻滞于G2/M期;survivin mR-NA的表达受到抑制;荧光染色发现有凋亡细胞.结论 成功构建人survivin基因shRNA表达载体的重组腺病毒,下调survivin表达后能诱导A549细胞凋亡,为研究肺癌RNAi途径的基因治疗奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁念慈	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	252	1946	22.0	32.0
2	王润秀	赣南医学院附属医院肾内科	26	55	4.0	6.0
3	覃燕梅	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	40	378	10.0	19.0
4	李昌武	江西省峡江县中医院内科	1	5	1.0	1.0