野生型和突变型nm23-H1基因原核表达载体的构建、表达及纯化

• 作者: 刘红雨 周清华 朱大兴 杨雪琴 王东 王阁 范羽 陈军 马力
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: nm23-H1基因 基因表达 转移抑制基因
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 23-27
• 页数: 5页
• 分类号: R734.2
• 字数: 3782字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2009.01.003

摘要

背景与目的 nm23-H1基因是一个肿瘤转移抑制基因,但关于nm23-H1基因抑制肿瘤转移的生化机理目前并不清楚.该实验目的就是构建nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化.方法 通过PCR方法扩增野生型和突变型nm23-H1目的片断,利用基因重组技术构建pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,鉴定正确克隆转化BL21(DE3)溶源菌,进行蛋白表达及可溶性分析,同时采用镍柱亲和层析法进行纯化,应用Western blot方法对纯化后蛋白进行鉴定检测.结果 通过酶切和测序鉴定,pET28a-nm23-H1野生型和突变型原核表达载体序列正确,编码框正确.转化溶源菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,且均为可溶性蛋白,Western blot检测结果提示野生型和突变型nm23-H1蛋白分子量为20 kDa,与预计值相符.结论 成功构建pET28a-nm23-H1野生型和P96S、H118F突变型原核表达载体,所表达蛋白可用于下一步实验研究.