双重套式PCR方法在霍乱弧菌外环境监测中的应用

• 作者: 严延生 徐海滨 杨劲松 王多春 董新平 郭维植 阚飙 陈爱平
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 学科: 地球科学
• 关键词: 霍乱弧菌 聚合酶链反应 环境监测
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 674-679
• 页数: 6页
• 分类号: X8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2009.08.008

摘要

目的 建立一种能够检测O1群和O139群霍乱弧菌的套式聚合酶链反应方法,并应用于外环境水体标本的监测.方法 根据GenBank发表的O1群和O139群霍乱弧菌O抗原编码基因rfb的序列,运用DNAStar Primer Select软件各自设计6条引物,检测不同引物组合的特异性,建立双重套式PCR方法同时检测O1群和O139群霍乱弧菌;并对该方法进行敏感度、特异度、重复性及现场评价.通过比较套式PCR与常规PCR的DNA检出下限分析该方法的敏感度;对32份套式PCR阳性的水体样本(O1群11份,O139群21份)进行重复性评价,挑选部分阳性扩增产物进行测序,分析其与相应基因序列的一致性.结果 建立的检测O1群和O139群霍乱弧菌的双重套式PCR体系,根据其扩增的片段大小能够区分O1群和O139群霍乱弧菌,而对其他弧菌DNA样品都未见特异性扩增;敏感度比常规PCR高15 000倍,且在多引物或者多模板共存于一个反应管的试验条件下,不会对敏感度产生干扰;32份套式PCR阳性的水样标本,经2次或3次套式PCR试验,结果显示该体系具有较好的重复性和一致性,阴性水样均无任何扩增产物,说明所用引物的特异性较好;序列分析表明扩增产物仅同霍乱弧菌相应的基因序列有100%的一致性.结论 本检测相应霍乱弧菌的双重套式PCR方法,具有灵敏、特异、快速、适合基层实验室的特点,可用于监测外环境水体中霍乱弧菌的存在及消长情况.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阚飙	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	120	614	11.0	19.0
3	严延生		161	1086	15.0	24.0
4	王多春	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	2	11	2.0	2.0
8	徐海滨		19	78	5.0	7.0
9	陈爱平		35	175	9.0	10.0
10	董新平		16	88	6.0	8.0
11	杨劲松		29	156	8.0	10.0
12	郭维植		25	155	8.0	10.0